Protein Maker是美國Protein Biosolutions公司研發的高通量蛋白純化系統。該系統解決了目前蛋白純化的瓶頸,可同時進行24個蛋白樣品的純化實驗,具有高通量,全自動,可編程等特點,滿足不同用戶對于不同類型蛋白的純化要求。
Protein Maker高通量蛋白純化系統可添加24個獨立的純化柱,每一個都有自己的緩沖液體系(平衡緩沖液A,洗滌緩沖液B,洗脫緩沖液和水)。Protein Maker結合24個精密的注射泵,每一個注射泵都有9個通路,可以實現不同緩沖液吸棄和快速切換。
Protein Maker高通量蛋白純化系統具有24個高分辨的UV檢測器,能夠幫助研究人員判定蛋白的洗脫效果,確定蛋白的種類并進行蛋白的精確定量。
板架上有20個位置,用于放置SBS板或架??梢杂糜跇悠返难b載,也可用于專用洗滌緩沖液等的載入。
圖2:Protein Maker板架
適用于高通量蛋白質組學實驗室中蛋白純化
· 平行蛋白色譜法
· 24個平行的純化
–Production Mode(24個不同的蛋白樣品,1種類型的色譜柱
– Scouting Mode(24個不同的色譜柱,一種蛋白樣品)
–Complex Purification Mode(多步純化)
· 可以運行24個色譜柱(0.1~10mL)
· 全自動操作
· 廣泛的樣本容量—0.5mL到250mL樣本容量
· 自定義應用程序
Protein Maker™軟件和使用界面(下圖)
點擊用戶界面允許操作者選擇不同的柱或改變參數用于自動化的操作,也可以進行手動的抽吸和分配操作。從開始到結束,Protein Maker™運行24個不同的1mL柱需要大約一小時。其中包括個別調整反應梯度(開始時輸入24-10mL蛋白樣品)
· 選擇操作方法和循環數
· 設置每一次操作的流量
· 選擇平衡和洗滌的循環數
· 設置每一板的體積和洗滌劑的組分
· *自動化的控制每一個泵、閥門和管架的位置
應用
? 250mL初始體積中進行抗體純化(蛋白A親和色譜法)
? 使用免疫損耗樹脂進行質譜檢測中樣品的準備和生物標記物的發現(血漿和腦脊髓液)
? (表面)誘導蛋白構建的平行表達和純化檢測( Ni-chelate chromatography)
? 24蛋白質樣品可以平行處理,蛋白質產量可以足夠用于大量的分析實驗
圖4:使用Protein Maker應用全自動兩步IMAC純化模式純化的蛋白進行SDS-PAGE分析。
圖5: 樣品從粗E.coli重提取,包括His6x-tagged重組蛋白,通過6個單獨的IMAC柱同時運行兩次(頂部)。Protein Maker™平行運行的12種不同的蛋白突變的SDS-PAGE分析。從純化的蛋白中發現兩種新的結晶形式(低于200次的結晶實驗)(底部)。