上海莼試生物技術有限公司
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參考價 | ¥1-¥5800 | /件 |
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型號
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品牌
其他品牌 -
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經銷商 -
所在地
上海市
更新時間:2024-09-30 14:21:26瀏覽次數:58
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原代細胞培養的具體步驟:
1、準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離:在消化過程中見消化液發混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500-1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養液。
7、計數:用計數板計數,如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養液調整后,分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說,pH要求在7.2-7.4范圍,培養液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調整。
8、培養:置于37℃溫箱培養,如用CO2溫箱培養,瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
商品屬性:
組織來源 | 雞卵泡組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
產品貨號 | CS-X2678 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介:
雞卵泡基膜分離自雞卵泡組織;成熟卵泡是卵巢的組織結構成分之一,卵泡腔很大,卵丘很明顯。卵泡內膜細胞緊靠卵泡顆粒層,與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔,內膜細胞呈多邊形,胞質清亮,胞核圓形,細胞間可見許多毛細血管,外膜細胞位于最外層,多呈梭形,與周圍結締組織分界不明顯。卵泡(follicle)中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞,在卵泡開始發育、卵細胞成長的同時,周圍的菱形細胞變為立方形,并由單層增生成復層,因其細胞漿內含有顆粒,故稱為顆粒細胞。初級卵泡的顆粒細胞為單層;次級卵泡的顆粒細胞增至復層;成熟卵泡的顆粒細胞展開又變為單層。顆粒細胞的胞核大而圓,著色深,細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部。
方法簡介:
公司實驗室分離的雞卵泡基膜經3β-HSD免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
質量檢測:
公司實驗室分離的雞卵泡基膜采用先機械分離后膠原酶反復消化法、并通過專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
原代細胞VS細胞系:
用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說,從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞,絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關),再加上取材,成本等因素,通常會把培養的第一代到第十代以內的細胞統稱為原代細胞。
原代細胞一般傳至10代左右,大部分細胞衰老死亡,但是有極少數的細胞能夠度過“危機"而繼續傳下去,存活的細胞一般能夠傳到40-50代,叫細胞株。當50代以后又會出現“危機",這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點,從而可能無限制地傳代下去,稱為細胞系。
也有認為細胞系指原代細胞培養物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培養細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系,因此,細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞,廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法,從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。
細胞系具有容易培養、種類多、價格便宜、無限傳代等優點,也非常容易在培養、凍存中發生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
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